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微生物菌种如何利用了冻干燥机进行冷藏

发布日期:2022-07-18      浏览次数:196

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江苏天翎仪器冻干技术水平日益提高,企业也在赋予冻干机新的动能,比如智能化、信息化等。当然,冻干机行业也不忘规范化地发展。冻干机起源于19世纪20年代的真空冷冻干燥技术,后真空冻干技术除了在医药上有着广泛应用,在生物制品、食品、血液制品、活性物质领域之外的领域也发挥了重要作用。下面小编为大家介绍下微生物菌种的冷冻干燥保藏操作流程:
冻干机适用于大多数细菌、放线菌、病毒、噬菌体、立克次体、霉菌和酵母等的真空冷冻干燥保藏,但不适于霉菌的菌丝型、菇类、藻类和原虫等。其操作流程如下:
1、安瓿管准备
安瓿管材料以中性玻璃为宜。清洗安瓿管时,先用2%盐酸浸泡过夜,自来水冲洗干净后,用蒸馏水浸泡至pH中性,干燥后、贴上标签,标上菌号及时间,加入脱脂棉塞后,121℃下高压灭菌15-20分钟,备用。
2、保护剂的选择和准备
保护剂种类要根据微生物类别选择。配制保护剂时,应注意其浓度及pH值,以及灭菌方法。如血清,可用过滤灭菌;牛奶要先脱脂,用离心方法去除上层油脂,一般在100℃间歇煮沸2-3次,每次10-30分钟,备用。
3、冻干样品的准备
在适宜的培养条件下将细胞培养至静止期或成熟期,进行纯度检查后(参见科技部自然科技资源平台联合管理办公室文件《微生物菌种纯度检测技术规程》(试行)),与保护剂混合均匀,分装。微生物培养物浓度以细胞或孢子不少于108-1010个/ml为宜(以大肠杆菌为例,为了取得每毫升1010个活细胞菌液2毫升-2.5毫升,只需10毫升琼脂斜面两支)。采用较长的毛细滴管,直接滴入安瓿管底部,注意不要溅污上部管壁,每管分装量约0.1-0.2毫升,若是球形安瓿管,装量为半个球部。若是液体培养的微生物,应离心去除培养基,然后将培养物与保护剂混匀,再分装于安瓿管中。分装安瓿管时间尽量要短,在1-2小时内分装完毕并预冻。分装时应注意在无菌条件下操作。
4、预冻
一般预冻2小时以上,温度达到-20℃到-35℃左右。
5、冷冻干燥
采用冻干机进行冷冻干燥。将冷冻后的样品安瓿管置于冷冻干燥机的干燥箱内,开始冷冻干燥,时间一般为8-20小时。
终止干燥时间应根据下列情况判断:
安瓿管内冻干物呈酥块状或松散片状;
真空度接近空载时的zui高值;
样品温度与管外温度接近;
选用1-2支对照管,其水份与菌悬液同量,视为干燥完结;
选用一个安瓿管,装1-2%氯化钴,如变深兰色,可视为干燥完结;
冷冻干燥完毕后,取出样品安瓿管置于干燥器内,备用。
6、真空封口及真空检验
将安瓿管颈部用强火焰拉细,然后采用真空泵抽真空,在真空条件下将安瓿管颈部加热熔封。熔封后的干燥管可采用高频电火花真空测定仪测定真空度。
7、保藏
安瓿管应低温避光保藏。
8、质量检查
冷冻干燥后抽取若干支安瓿管进行各项指标检查,如存活率、生产能力、形态变异、杂菌污染等。新版GMP附录1第三章第十一条规定应当对各个洁净级别的微生物进行动态监测,以评估无菌生产的微生物状况。其中监测方法包含沉降菌法、定量空气浮游菌采样法和表面取样法等。与此同时,新版GMP更强调在关键操作的全过程均应该对*洁净区进行悬浮粒子和微生物监测。使灌装与冻干区域相连接的半自动进出料装载机构以L型布局形式出现,与以往的老式冻干机的大开门式相比较,因良好的隔离操作,环境控制更趋向于理性的数据控制,且无菌控制的可信度大大增加,L型布局的合理设计使*区域更集中,在环境监测时,监测点也更容易把握,便于实施。

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